Histology of the testis and the epididymal ducts from hoary fox Lycalopex vetulus (Lund, 1842) / Histologia dos testículos e ductos epididimários da raposa-do-campo Lycalopex vetulus (Lund, 1842)

The hoary fox Lycalopex vetulus (Lund, 1842) is a small canid, endemic to Brazil, belonging to the Canidae family, widely distributed in the country, occurring records in different regions and habitats. The objective of this study is to describe morphologically the testicles and epididymal ducts of hoary fox. The animals, coming from the zoo of Federal University of Mato Grosso, Brazil, had died by natural causes. The male reproductive system was dissected to collect the testicles. The samples were fragmented and histologically examined. Microscopically, the testes were coated by the vaginal and albuginea tunic, formed by modeled dense connective tissue with large amount of collagen fibers. Into the organ, convoluted seminiferous tubules were surrounded by a basement membrane characterized by the presence of myoid and Sertoli cells and germinative epithelium composed by Between the seminiferous tubules, interstitial tissue composed of connective tissue, blood and lymph vessels and Leydig cells in polyhedral shape was present. The epididymal ducts showed pseudostratified columnar epithelium with secretory cells, in which stereocilia located on a basement membrane filled by myoid cells were found. The structures observed by us are very similar to those described for other mammals.(AU)

A raposa-do-campo Lycalopex vetulus (Lund, 1842) é um canídeo de pequeno porte, endêmico do Brasil, pertencente a família Canidae, com ampla distribuição no país, ocorrendo registros em várias regiões e habitats diferentes. Com base nessa informação, o objetivo deste trabalho é caracterizar morfologicamente os testículos e ductos epididimários da raposa-do-campo. O animal, oriundo do zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Brasil, veio a óbito por causas naturais e o sistema reprodutor masculino foi dissecado para coleta dos testículos. As amostras retiradas foram fragmentadas e histológicamente examinadas. A partir das análises microscópicas dos testículos foram identificados: a túnica vaginal e albugínea, formada por tecido conjuntivo denso modelado, com grande quantidade de fibras colágenas; túbulos seminíferos enovelados e revestidos por epitélio germinativo e células de Sertoli, envolvidos por uma membrana basal com presença de células mioides; tecido intersticial entre os túbulos seminíferos constituído de tecido conjuntivo, vasos sanguíneos e linfáticos, e células de Leydig em formato poliédrico. Os ductos epididimários apresentaram epitélio cilíndrico pseudoestratificado com células secretoras dos quais projetam estereocílios, situados sobre uma membrana basal repleta por células mióides. As estruturas por nós observadas possuem muita semelhança com as demais descrições para mamíferos.(AU)

Detection of resistance genes and evaluation of water quality at zoo lakes in Brazil / Detecção de genes de resistência e qualidade da água dos lagos de zoológico, Brasil

ABSTRACT: The investigation of the presence of antibiotic-resistance genes in aquatic environments is important to identify possible reservoirs of resistant microorganisms that could be a threat to human and animal health. The aims of this study were to analyze the presence of genes conferring resistance to antimicrobials in the aquatic environment and to assess the quality of water in zoo lakes. Results showed a pattern of genes conferring resistance to multiple antibiotics and turbidity, which was expected to be due to the presence of contaminants. The most frequent genes were sul I and sul II (sulfonamides), which were present in all the lakes, followed by genes encoding β-lactamases such as blaPSE I (77.8%) and ampC (66.7%). However, tet(K), tet(M), and ermC genes were not detected. There was a positive correlation between the number of Enterobacteriaceae and resistance genes. In conclusion, the source of contamination of all lakes was probably the neighboring urban sewage or wastewater that increased the frequency of the total coliforms and resistance genes, which in turn posed a threat to the conservation of the animal life inhabiting the zoo.

RESUMO: A investigação da presença de genes de resistência a antibióticos (ARGs) em ambientes aquáticos é importante para identificação de possíveis reservatórios de microrganismos resistentes que podem ser uma ameaça para a saúde humana e animal. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de genes de resistência a antimicrobianos e a qualidade da água de zoológico. Os resultados mostraram um padrão de genes de resistência a múltiplos antibióticos e turbidez da água, devido à presença de contaminantes. Os genes mais frequentes foram sul I e sul II (sulfonamidas) que estão presentes em todos os lagos, e β-lactamases como blaPSE I (77,8%) e ampC (66,7%). Os genes tet(K), tet(M) e ermC não foram detectados. Houve correlação entre o número de Enterobacteriaceae e aumento na detecção de genes de resistência. As fontes de contaminação dos lagos são, provavelmente, esgoto urbano vizinho ou de águas residuais que aumentam a presença de coliformes totais e a frequência dos genes de resistência, que podem ser um risco para vida de animais silvestres em cativeiro.

Análise seminal e padronização da coloração eosina-nigrosina em tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) / Giant anteater's (Myrmecophaga tridactyla) semen analysis and eosin-nigrosin staining standardization

Os estudos que envolvem os aspectos reprodutivos do tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) podem contribuir para a preservação da espécie auxiliando no desenvolvimento de um manejo reprodutivo mais eficiente em cativeiro. O presente estudo teve como objetivo obter uma melhor compreensão da fisiologia reprodutiva por meio da caracterização física e morfológica do sêmen de tamanduá-bandeira. Foram realizados três exames reprodutivos em dois tamanduás-bandeira mantidos no Zoológico da Universidade Federal de Mato Grosso, Cuiabá/MT/Brasil. O método de coleta do sêmen foi a eletroejaculação. O volume médio obtido foi de 2,62 ± 1,67 mL, com motilidade média de 50 ± 20% e vigor de 2,17 ± 0,82. O pH médio foi de 7,29 ± 0,40. Quanto à patologia espermática foram encontrados 16,5% de defeitos maiores, 20,5 % de defeitos menores, perfazendo 37 ± 4,2% de defeitos totais. Os testes preliminares de padronização da coloração eosina-nigrosina mostraram-se eficazes para avaliar a integridade da membrana plasmática de espermatozoides nesta espécie, que nesta pesquisa foi de 65 ± 7,77%.

Studies involving the reproductive aspects of the giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) can be contributed to the preservation of this specie. The aim of these study was accessed the reproductive physiology and describe physical and morphological giant anteater's sperm. We conducted three reproductive examination in two anteater maintained at the Federal University of Mato Grosso Zoo, Cuiaba/MT/Brazil. The method of semen collection used was electroejaculation. The volume average obtained was 2.62 ± 1.67 mL, the motility average was 50 ± 20% and the vigor was 2.17 ± 0.82. The pH mean was 7.29 ± 0.40. The sperm average concentration was 33.33 ± 12.52 x 106 sperm/mL. According sperm pathology we found 16.5% of larger defects, 20.5% of minor defects, amounting to 37 ± 4.2% of total defects. The preliminary tests of standardization of eosin-nigrosin staining proved to be effective to evaluate the integrity of plasma membrane of sperm in this species, in this research was 65 ± 7,77%.

[Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso]. / Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em canídeos silvestres mantidos em cativeiro, no Estado de Mato Grosso.

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a zoonosis that affects many mammals, and domestic canids are the main reservoirs in urban environments. This note describes infection by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi among wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso, Brazil. METHODS: Skin, bone marrow and lymph node samples were collected from six crab-eating foxes (Cerdocyon thous) and one bush dog (Spheotos venaticus), in order to detect and characterize Leishmania using the PCR-RFLP technique. RESULTS: All the animals studied were positive for Leishmania (L.) infantum chagasi. CONCLUSIONS: This study highlights the importance of adequate monitoring of these animals, as well as greater control of this disease, given that these animals are in a public recreation environment.

Leishmania (Leishmania) infantum chagasi em canídeos silvestres mantidos em cativeiro, no Estado de Mato Grosso / Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso

INTRODUÇÃO: Leishmaniose visceral é uma zoonose que acomete diversos mamíferos tendo os canídeos domésticos como principais reservatórios em ambiente urbano. A presente nota descreve a infecção de canídeos silvestres por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi mantidos em cativeiro no Estado de Mato Grosso, Brasil. MÉTODOS: De seis raposas (Cerdocyon thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus), foram coletadas amostras de pele, medula óssea e linfonodo para detecção e caracterização de Leishmania sp pela técnica de PCR-RFLP. RESULTADOS: Todos as animais pesquisados apresentaram-se positivos para Leishmania (L.) infantum chagasi. CONCLUSÕES: Destaca-se a importância de monitoramento adequado dos mesmos, além do maior controle desta enfermidade já que estes animais estão em ambientes de recreação pública.

INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a zoonosis that affects many mammals, and domestic canids are the main reservoirs in urban environments. This note describes infection by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi among wild canids kept in captivity in the State of Mato Grosso, Brazil. METHODS: Skin, bone marrow and lymph node samples were collected from six crab-eating foxes (Cerdocyon thous) and one bush dog (Spheotos venaticus), in order to detect and characterize Leishmania using the PCR-RFLP technique. RESULTS: All the animals studied were positive for Leishmania (L.) infantum chagasi. CONCLUSIONS: This study highlights the importance of adequate monitoring of these animals, as well as greater control of this disease, given that these animals are in a public recreation environment.

Análise citogenética de oócitos de jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) coletados após estimulação ovariana / Cytogenetic analyses of ocelot (Leopardus pardalis) and tigrinus (Leopardus tigrinus) oocytes collected after ovarian stimulation

Este estudo representa a primeira avaliação da maturação nuclear de oócitos por análise citogenética realizada em duas espécies de felídeos brasileiros ameaçados de extinção: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4).Os animais foram submetidos à estimulação ovariana alternada come CG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo-laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Dos 33 oócitos de jaguatirica avaliados 12% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior e dos 11 oócitos de gato-do-mato-pequeno avaliados 36% (n=4)apresentaram cromossomos condensados em seu interior, no entanto,nenhum oócito encontrava-se em metáfase II. Avaliação morfológica dos oócitos mostrou as mesmas características encontradas em outros mamíferos. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa(p>0,05) no número total de estruturas ovarianas (folículos e corpos lúteos recentes) observadas em estimulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento(5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (2,6±0,7eCG/hCG; 2,0±0,5 pFSH/pLH) para L. tigrinus. Apesar das limitações deste experimento e do número reduzido de oócitos avaliados podemos sugerir que a aspiração folicular após estimulação ovariana com eCG/hCG e pFSH/pLH alternadamente resulta na recuperação de oócitos imaturos, que necessitam de cultivo em meios específicos para atingir o estágio de Metáfase II.

This study represents the first assessment of oocyte’s nuclear maturation by cytogenetical analysis in two endangered Brazilian felids:L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4). Females were treated 6 times with alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of 4 months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the morphological and cytogenetical analysis in order to evaluate the meiotic cycle and maturation (metaphase II), respectively. In 33 ocelot’s oocytes observed 12% (n=4) showed condensed chromosomes and in 11 tigrinu’s oocytes observed 36% (n=4) showed condensed chromosomes. However no oocytes in metaphase II were observed.O ocytes morphological evaluation showed the same characteristics were observed in others mammals. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences (p>0.05)were found regarding to the number of total ovarian structures (total follicles and CL) during successive gonadotropin treatments. There were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 eCG/hCG and 7.9 ± 0.9 pFSH/pLH) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 eCG/hCG and 2.0 ± 0.5 pFSH/pLH).With these results we can suggest that follicular aspiration after ovarian stimulation with exogenous gonadotrophins results in immature oocytes, needing in vitro culture in specific mediums for metaphase II stage was observed.

Validação de conjuntos diagnósticos comerciais para dosagem sérica de progesterona e estradiol em jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-matopequeno (Leopardus tigrinus / Progesterone and estradiol commercial kits validation in serum of ocelots (Leopardus pardalis) and tigrina (Leopardus tigrinus)

Este estudo teve como objetivo validar os conjuntos diagnósticos m comerciais DPC (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA), em fase sólida, para dosagem de progesterona e DSL (Diagnostic System Laboratories INC/USA), em fase líquida, para dosagem de estradiol, por radioimunoensaio, em soro de Leopardus pardalis (n=5)e Leopardus tigrinus (n=4), antes (15-30 dias) e após (24-28 horas) tratamento com gonadotropinas exógenas (hCG/ Novormon® eeCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® e pLH/Lutropin-V®). A concentração sérica para Leopardus pardalis variou 0,005 a 0,151ng/ml para estradiol e 0,15-37,22ng/ml para progesterona. A concentração sérica para Leopardus tigrinus variou 0,012-0,147ng/ml para estradiol e 0,06-34,09ng/ml para progesterona. A sensibilidade mínima detectada foi 0,004 ng/ml para progesterona e 0,00014ng/ml para estradiol. Para progesterona o coeficiente intra-ensaio baixo foi 2,58% e alto6,36%, já o coeficiente inter-ensaio baixo foi 0,67% e alto 5,55%. Para o estradiol o coeficiente intra-ensaio baixo foi 0,69% e alto 4,15%,sendo o coeficiente inter-ensaio baixo 1,40% e alto 3,00%. Paralelismo foi encontrado para progesterona e conjunto comercial DPC com r = 0,96 para Leopardus pardalis e r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Para estradiol em conjunto comercial DSL paralelismo foi encontrado com r = 0,98 para Leopardus pardalis e com r = 0,99 para Leopardus tigrinus. Com estes resultados podemos concluir que o conjunto diagnóstico comercial DPC para dosagem de progesterona e DSL para dosagem de estradiol foram validados para utilização em soro de Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus, podendo ser utilizado como ferramenta no manejo reprodutivo destas espécies visando à conservação.

DPC commercial kit (Coat-A-Count - Diagnostic Products Corporation/USA) and DSL commercial kit (Diagnostic System Laboratories INC/USA) were used for progesterone and estradiol radioimmunoassay validation in serum of two endangered Brazilian felids: Leopardus pardalis (n=5) and Leopardus tigrinus (n=4) before (15-30 days) and after (24-28 hours) exogenous gonadotrophins treatment(hCG/ Novormon® and eCG/ Vetecor®; pFSH/Folltropin-V® andpLH/Lutropin-V®). Variation of estradiol concentration was 0.005 -0.151 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus pardalis. Variation of estradiol concentration was 0.012 -0.147 ng/ml and progesterone concentration was 0.15 - 37.22 ng/ml for Leopardus tigrinus. Minimum sensibility detected for progesterone was 0.004 ng/ml and for estradiol was 0.00014 ng/ml. Progesterone intra-assay coefficient was 2.58% and 6.36% and inter-assay was 0.67% and 5.55%. Estradiol intra-assay coefficient was 0.69% and 4.15%,and inter-assay was 1.40% and 3.00%. Parallelism was used for kits validation. Progesterone and DPC commercial kit Parallelism wasr = 0.96 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. Estradiol and DSL commercial kit Parallelism was r = 0.98 for Leopardus pardalis and r = 0.99 for Leopardus tigrinus. In conclusion, these results showed that DPC commercial kit for serum progesterone dosages and DSL commercial kit for serum estradiol dosages can be used for Leopardus pardalis e Leopardus tigrinus. These findings are potentially valuable for the reproductive management and conservation of endangered felid populations.

Comparação de método para análise de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas (Leopardus pardalis) submetidas a tratamento hormonal e vídeo-laparoscopia / Comparison of methods fecal glucocorticoids metabolite analyses in ocelots (Leopardus pardalis) submited to hormonal treatment and video-laparoscopy

Dois metódos de extração de metabólitos fecais 32,33 e dois conjuntos comerciais (“ImmuChem Doubly Antibody Corticosterone 125I RIA”-ICN Biomedicals e “Coat-a-count Cortisol 125I RIE” - DPC) foram utilizados na mensuração dos metabólitos de glicocorticóides (cortisole corticosterona) em amostras de fezes de jaguatiricas (Leopardus pardalis) (n=3), antes e após tratamento hormonal e procedimentos de vídeo-laparoscopia. O objetivo desse estudo foi comparar e validar fisiologicamente os diferentes protocolos de extração e diferentes conjuntos comerciais na mensuração hormonal. Não houve diferença significativa com relação ao método de extração dos metabólitos. O conjunto comercial ICN Biomedicals provou ser melhor na detecção de metabólitos fecais de glicocorticóides em jaguatiricas.

The objective of this study was to compare two different fecal metabolites extraction protocols 32,33 and two commercial kits used to analyse fecal glucocorticoids (cortisol and corticosterone) in ocelots (Leopardus pardalis) submitted to hormonal treatment and video-laparoscopy procedure. Based on hormonal analyses, both extraction protocols exhibited similar performance. One commercial kit (ICN Biomedicals) had better results than another (DPC) on glucocorticoids metabolites evaluation.

Frozen Jaguar (Panthera onca) sperm capacitation and ability to penetrate zona free hamster oocytes / Capacitação espermática de sêmem congelado de onça pintada (Panthera onca) e ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida

Assisted reproductive technologies in endangered species, such as artificial insemination, in vitro fertilization and embryo transfer, can be viewed as one potential approach for safeguarding species. Toward this aim, the objective of this study was to evaluate the fertility of frozen jaguar (Panthera onca) sperm and Tyrod's Talp PVA capacitation medium using the hamster zona free oocyte penetration assay. Ejaculates were collected from nine animals using electroejaculation and cryopreserved. Sperm capacitation was performed by swim-up technique using Tyrod's Talp PVA medium at room temperature. Penetration was considered when the spermatozoa head decondensation was visualized within the oocyte. This assay showed 15.4 % penetrations (350/2275 oocytes). Results of this study showed high sperm abnormalities, low sperm quality after cryopreservation, and low percentage of penetrations. However, the penetration results showed lhat the cryopreserved jaguar's semen can be used for artificial insemination, in vitro fertilization and intra cytoplasmatic sperm injection, supporting the semen bank creation for this specie.

Biotecnologias reprodutivas aplicadas a espécies selvagens, como inseminação artificial, fertilização in vitro e transferência de embriões, são vistas como um potencial caminho para proteção das espécies ameaçadas de extinção. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi avaliar a fertilidade do sêmen congelado de onças pintadas (Panthera onca) e o meio de capacitação espermática usando o ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Ejaculados de nove animais foram coletados por eletroejaculação e criopreservados. Para determinar a capacitação espermática foi utilizada a técnica swin-up com meio Tyrods Talp PVA a temperatura ambiente. No ensaio de penetração em oócitos de hamster livres de zona pelúcida foram considerados como oócitos penetrados aqueles que apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada. O ensaio foi realizado em um total de 2275 oócitos, dos quais 350 apresentaram em seu interior a cabeça do espermatozóide descondensada, perfazendo um total de 15.4% de penetração. Os resultados deste estudo demonstraram alto índice de anormalidades espermáticas, baixa qualidade do sêmen e baixa porcentagem de penetrações. Entretanto, os resultados de penetração espermática demonstraram que sêmen congelado de onça pintada poderá ser utilizado para inseminação artificial, fertilização in vitro e injeção intracitoplasmática dando suporte para a criação de um banco de sêmen para esta espécie.

Avaliação das características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro, antes e após vasectomia bilateral / Semen characteristics evaluation in capuchin monkey (Cebus apella) in captivity, before and after bilateral vasectomy

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da vasectomia bilateral nas características seminais de macacos pregos (Cebus apella) mantidos em cativeiro. Foram utilizados seis animais da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral dos animais. A primeira colheita foi realizada 15 dias antes da vasectomia e as colheitas posteriores foram realizadas com intervalo de 30 dias até o momento da eliminação completa de espermatozóides do líquido seminal. Imediatamente após a ejaculação, o sêmen foi avaliado quanto suas características físicas, iniciando-se pelo volume (ml) da fração líquida e medição do pH. Posteriormente foram avaliados motilidade (%) e vigor espermático (0-5). Uma fração do sêmen foi diluída em formol salina 10%, para posterior avaliação da concentração espermática (cel/ml) e das características morfológicas (%). A integridade do acrossoma foi avaliada apenas na primeira colheita e a concentração espermática foi avaliada em apenas quatro animais na colheita antes da vasectomia devido ao fato de não haver quantidade suficiente de sêmen. Na primeira colheita após a vasectomia, todos os animais apresentaram espermatozóides com motilidade e vigor iguais a zero. No entanto, a concentração espermática pode ser avaliada até a segunda colheita pós-vasectomia, apresentando as Médias/EP 2.8±1.3 x 10 elevado a 6ª /ml antes da vasectomia e 4.7±1.6 e 0.8±0.7 x 10 elevado a 6ª /ml, após a vasectomia, respectivamente. Apenas na terceira colheita a média da concentração espermática foi igual a zero. Os resultados sugerem que machos vasectomizados devam voltar ao grupo, sem risco de fecundação acidental, após três meses da realização da vasectomia.

The effects of bilateral vasectomy on the seminal characteristics were assessed in capuchin monkeys (Cebus apella). Six adult male monkeys were housed separately in outdoor pens at the Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Semen samples were collected by electroejaculation, after anesthetized the animals, 15 days before and once a month from 1 to 5 months after vasectomy. Immediately after the ejaculation, semen was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigour (0-5), concentration (cells / ml), defects (%) and percentage of intact acrosoma (%). The percentage of intact acrossoma was analyzed only in the collection before the vasectomy and the concentration was done in only four males in these collection because have no semen enough for all analyses. One month after the vasectomy ejaculated spermatozoa were non-motilite and non-vigour in all vasectomized males. In addition the Mean/SEM of cells/ml before the vasectomy was 2.8±1.3 x10 involution 6ª /ml and after two months of the vasectomy was 4.7±1.6 x10 involution 6ª/ml, 0.8±0.7 x106/ml,respectively. Only after the thirty month the number of cells/ml was zero. Our results suggest that the vasectomized males may be back to the group, without risks of accidental fecundating, only 3 months after vasectomy.

O efeito das enzimas hialuronidase e tripsina na liquefação do sêmen de macacos pregos (Cebus apella) / The effect of hyaluronidase and trypsin ensymes on liquefaction of semen in capuchin monkey (Cebus apella)

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apeiia), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p > 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p > 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo.

The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treatments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p > 0.05) between coagulated fraction diluted either in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p<0.05), but there were no difference in acrosome integrity (p > 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.

Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF), em testículo de onça pintada (Panthera onca), utilizada como ferramenta no diagnóstico de infertilidade / Testicular fine needle aspiration cytology as a diagnostic tool in jaguar (Panthera onca) infertility

Técnicas de biópsia, caracterizadas pela remoção de segmentos de órgãos e tecidos para análise histopatológica, não são indicadas no auxílio diagnóstico de alterações testiculares para animais ameaçados de extinção, por não serem totalmente isentas de riscos. Neste sentido, é de grande interesse que se desenvolvam técnicas de biópsia testicular cada vez mais seguras e com o mínimo de conseqüências negativas. Com este intuito três onças pintadas (Panthera onca) foram submetidas a exames de Citologia Aspirativa por Agulha Fina (CAAF). Amostras foram obtidas através da punção aspirativa dos testículos, esfregaços foram confeccionados, corados com Panótico e analisados sob Microscopia Optica. Simultaneamente foram realizadas coletas de sêmen para avaliação do volume, pH, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto à avaliação espermática, os animais apresentaram valores semelhantes aos encontrados na literatura quanto ao volume, pH, motilidade, vigor e morfologia espermáticas. Quanto a concentração espermática os animais apresentaram valores abaixo dos encontrados na literatura. Nos exames de CAAF, todas as gerações de células germinativas foram identificadas, indicando espermatogênese normal em todos os animais, com exceção das espermátides finais duplas que ainda não foram relatadas como achados em punções testiculares de outras espécies, o que vem confirmar a elevada porcentagem de células teratológicas encontradas nesses animais. Desta forma, podemos concluir que a CAAF testicular é um método diagnóstico auxiliar importante na detecção de alterações testiculares em casos de sub ou infertilidade, podendo ser utilizados na rotina de investigação do trato reprodutivo masculino, quando o exame histopatológico, por ser um método altamente invasivo, é desaconselhável

Avaliaçäo da capacidade de penetraçäo de sêmen congelado de onça pintada (Panthera onca) em oócitos heterólogos / Penetration assay of frozen jaguar (Panthera onca) sperm in heterologous oocytes

A aplicaçäo de técnicas de reproduçäo assistida em espécies selvagens ameaçadas de extinçäo surge como método alternativo com o intuito de minimizar a diminuiçäo da variabilidade genética das populaçöes. Com o objetivo de determinar a fertilidade de onças pintadas (Panthera onca) mantidas em cativeiro e avaliar a eficácia dos meios de capacitaçäo espermática, foi realizado o ensaio de penetraçäo em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Para a realizaçäo do experimento, foi utilizado sêmen congelado de 3 animais do Bosque dos Jequitibás, Campinas/SP. Foram testadas 3 técnicas: Percoll, Swim-up e Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38§C, considerando como oócitos penetrados aqueles que apresentaram no seu interior a descondensaçäo da cabeça do espermatozóide. A média de penetraçöes da técnica Percoll (26,5 por cento) foi significativamente maior comparada à técnica Swim-up (8,1 por cento), sendo que näo houve penetraçäo utilizando a técnica Swim-up + 1 hora em estufa de CO2 a 38ºC (x2 = 19,93; p < 0,05). Analisando os resultados, concluímos que as técnicas Percoll e Swim-up foram eficientes para a realizaçäo do ensaio de penetraçäo, comprovando a capacidade de penetraçäo dos espermatozóides de onças pintadas (Panthera onca), pós-descongelamento, em oócitos de hamster livres de zona pelúcida. Porém, houve uma baixa porcentagem de penetraçäo, a qual pode estar associada ao elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais. Mais estudos devem ser conduzidos com a finalidade de avaliar a fertilidade destes animais e até que ponto a variabilidade da espécie pode estar comprometida